1、首先將內層滅菌桶取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

    2、放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，高壓蒸汽滅菌器以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。

    3、加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。

    4、用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣*排盡后，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌。

    5、高壓蒸汽滅菌器滅菌所需時間到后，切斷電源或關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生污染。

    6、將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時，經檢查若無雜菌生長，即可待用。

    高壓蒸汽滅菌器的使用方法

    （1）在外層鍋內加適量的水，使水面與三角擱架相平為宜，將需要滅菌的物品放入內層鍋，蓋好鍋蓋并對稱地扭緊螺旋。

    （2）加熱使鍋內產生蒸氣，當壓力表指針達到0.5個大氣帕時，高壓蒸汽滅菌器打開排氣閥，將冷空氣排出，此時壓力表指針下降，當指針下降至零時，即將排氣閥關好。

    （3）繼續加熱，鍋內蒸氣增加，壓力表指針又上升，當鍋內壓力增加到所需壓力（121℃）時，將火力減小，按所滅菌物品的特點，使蒸氣壓力維持所需壓力一定時間（15-20min），然后將滅菌器斷電，讓其自然冷后再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物。